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Jul 01, 2023

新しいキャプチャおよびライゲーションプローブの実装

Malaria Journal volume 22、記事番号: 21 (2023) この記事を引用 1337 アクセス 2 Altmetric メトリクスの詳細 マラリア排除のための集団スクリーニングと治療 (MSAT) には理想的な診断が存在しない

Malaria Journal volume 22、記事番号: 21 (2023) この記事を引用

1337 アクセス

2 オルトメトリック

メトリクスの詳細

マラリア撲滅のための集団スクリーニングおよび治療 (MSAT) には、現場で対象集団を高感度かつ手頃な価格で検査できる理想的な診断ツールがありません。 この研究では、キャプチャ アンド ライゲーション プローブ-PCR (CLIP-PCR) がミャンマーのライザ市のフィールド MSAT で使用できるかどうかを評価しました。

0 日目に、各参加者から 2 つの乾燥血液スポットを収集しました。 1日目に、ワークベンチ、バイオセーフティキャビネット、冷蔵庫、卓上振盪インキュベーター、qPCR装置を備えた20平方メートルの実験室で、4人の技術者がサンプルプールを使用したCLIP-PCRを使用して、すべてのサンプルのマラリア原虫のスクリーニングを行った。中国国境の町ナバン。 2日目に、すべての陽性者が追跡調査され、治療を受けました。

15,038人（総人口の65％）が検査を受け、204人（1.36％）がCLIP-PCR陽性でした。 このうち、188人、14人、2人が三日熱マラリア原虫、熱帯熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫/P.三日熱マラリア原虫に感染していた。 それぞれ熱帯熱マラリア原虫ミックス。 検査能力は 1 日あたり 538 人で、費用は 1 人あたり 0.92 米ドルでした。 顕微鏡下での感染の割合は 64.7% でした。 すべての陽性者は採血後 72 時間以内に治療を受けました。

MSAT で低透過率設定で CLIP-PCR を使用すると、中国とミャンマーの国境地域でのマラリア撲滅の取り組みをサポートできます。

マラリアの集団スクリーニングと治療 (MSAT) は、マラリアの症状があるかどうかに関係なく、地理的に広い地域の人口全体を検査し、陽性者のみを治療することと定義されています。 このようなアプローチはマラリアの疫学に関する重要な情報を提供し、さらなる疾患封じ込めの取り組みに役立つ可能性があり[1]、薬物の大量投与よりも対象集団に受け入れられる可能性が高くなります[2]。 さらに、三日熱マラリア原虫の発生を制御するためのプリマキンによる集団予防的治療は、対象地域の人口におけるグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症の割合が高い（最大14.8%）ため、危険である可能性がある[3]。 最近、マラリア撲滅の文脈で MSAT 戦略が新たな注目を集めていますが、世界保健機関 (WHO) は、高感度かつハイスループットの診断ツールが不足しているため、マラリア伝播を阻止するための介入戦略として MSAT を推奨しませんでした。これはコスト効率が高く、運用も現場に優しいものです [2、4]。

この課題を克服するために、キャプチャー アンド ライゲーション プローブ PCR (CLIP-PCR) と呼ばれる 96 ウェル プレート プラットフォームでのハイスループット分子アッセイが開発されました [5]。これにより、核酸の精製や逆転写を行わずにマラリア RNA を直接検出できます。検出限界は 0.01 マラリア原虫/μL 血液、または 3 mm 乾燥ブラッドスポット (DBS) を使用した場合は約 0.33 原虫/μL です [5、8]。 これは、低伝播環境での PCR ベースのマラリア スクリーニングについて WHO が推奨する検出限界 (寄生虫 2 匹/μL 以下) を満たしており [6]、顕微鏡や標準的なネステッド PCR よりもマラリア スクリーニングが容易かつ安価になります [7, 8]。 この方法では、血液サンプル中の 18 S rRNA ターゲットが細胞溶解を通じて放出され、サンドイッチ ハイブリダイゼーションを通じて 96 ウェル捕捉プレートのウェル上の一連の特異的なテールプローブによって捕捉されます。 余分なプローブと不純物を除去した後、結合したテール付きプローブをライゲーションして、その後の qPCR 増幅と検出のための一本鎖テンプレートを形成します [5]。 最近、CLIP-PCR の改良版であるマルチセクション CLIP-PCR (mCLIP-PCR) が開発され、大幅に短縮されたアッセイ時間での Plasmodium 属および種の同定が可能になりました [9]。

カチン特別地域 II (KSR2) はミャンマー北部に位置する貧しい山岳地帯で、中国雲南省迎江県と 214.6 km の陸境を共有しています。 2012年のKSR2での地域紛争以来、多数の国内避難民が中国・ミャンマー国境沿いに移住・再定住し、中国（雲南省）とミャンマーの国境を越えた共同マラリア予防・抑制活動の成果にリスクをもたらしている。 [10、11、12、13、14]。 ミャンマーのKSR2では、マラリアの発生率は2012年までの2.1%から2016年には5.1%に増加しました[15]。 さらに、2016年にはライザ市とその周辺地域で三日熱マラリア原虫の流行が観察され[16]、マラリア症例数は2015年の940人から2016年には2,080人と2.3倍に急増した[16]。 ミャンマーから迎江県に輸入されたマラリア症例数は、2012年の35人[17]から2016年には185人[16]に急速に増加し、2020年までに迎江県でマラリアを撲滅するという目標を危うくしている[18、19、20]。